Kompatybilność buforów stosowanych do zawieszenia komórek z powierzchnią “szkiełek” mikroskopowych typu Permanox.

Nunc w produkcji Lab-Tek TM Chamber Slide stosuje 2 rodzaje materiałów do produkcji “szkiełek” mikroskopowych. Są to: plastik i szkło. Jednym z plastików jest Permanox, który powstał na bazie specjalnego, przepuszczalnego dla tlenu polimeru. Polimer ten zapewnia wyśmienite właściwości optyczne. Jest on jednocześnie odporny na szeroką gamę stosowanych rozpuszczalników takich jak: kwasy, zasady, rozpuszczalniki organiczne (etanol) i niektóre węglowodorowe jak glikol etylenowy.

Permanox nie jest jednak kompatybilny z żadnym z odczynników, który zawiera takie rozpuszczalniki jak ksylen lub toluen. Rozpuszczalniki te spowodują zmętnienie powierzchni “szkiełka”.

Przedstawiona poniżej tabela zawiera listę wodnych buforów, które mogą być stosowane z Permanox Lab-Tek TM Chamber Slide. Kompatybilność “szkiełek” Permanox z poszczególnymi buforami została opracowana na podstawie stopnia zmętnienia powierzchni w okresie 1 tygodnia lub dłużej w temperaturze pokojowej. Zastosowanie poszczególnych buforów zostało zachowane zgodnie z informacją producenta. Zgodność barwienia z buforem musi być optymalizowana dla każdej aplikacji.

Przedstawione w tabeli bufory do zawiesin komórkowych mogą być zakupione w następujących firmach:

Shandon Lipshaw, 171 Industry drive, Pittsburgh, PA 15275.

telefon: 0-01 412 788 2460, fax: 0-01 412 788 2480

 

Biomedia, P.O. Box 8045, Foster City, CA 94404

telefon: 0-01 415 341 8787, fax: 0-01 415 341 2299

 

Vector Laboratories, Inc., 30 Ingold road, Burlingame, CA 94010

telefon: 0-01 415 697 3600, fax: 0-01 415 697 0339

  

Firma

Nazwa Produktu

Opis produktu

Zastosowanie

 Zgodność z PermanoxTM

Shandon-Lipshaw

Aqua-Perm

 Roztwór wodny
  • stałe
  • płynne nakrycie
  • przechowywanie i użycie w temp. pokojowej

Immunocytochemia

  • Obserwacje mikroskopowe używając immunoperoksydazy (AEC) lub fosfatazy alkalicznej (Fast Red).

TAK

Shandon-Lipshaw

Permafluor

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie 2-8oC
  • użycie temp. pokojowa

Mikroskopia Fluorescencyjna

  • Zwiększa intensywność FITC i redukuje blaknięcie

TAK

Shandon-Lipshaw

Geltol

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie 2-8oC
  • użycie temp. pokojowa

Znakowania Immunocytochemiczne

  • AEC lub Fast Red

TAK

Shandon-Lipshaw

Immu-Mount

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie: temp. pokojowa

Znakowania Immunocytochemiczne zamrożonych skrawków

TAK

Shandon-Lipshaw

Aqua-Mount

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie: temp. pokojowa

Znakowania Immunocytochemiczne

  • Immunofluorescencja

TAK

Biomeda

Gel Mount

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie: temp. pokojowa

Immunofluorescencja

  • używane z fluoresceiną, rhodaminą, Texas Red i fikobiliproteinami

TAK

Biomeda

Crystal Mount

 Roztwór wodny
  • stałe
  • przechowywanie: temp. pokojowa
  • nie wymagane są szkiełka nakrywkowe
  • wymaga podgrzania: temp. 70-80oC przez 10 min

Znakowania Immunocytochemiczne

(AEC, BCIP, NBT, DAB)

  • immunofluorescencja
  • zgodny z większością fluorochromów

NIE

“szkiełka” mogą ulec zmętnieniu gdy zostaną podgrzane

Vector Lab

Vectashield

 Roztwór wodny
  • niestałe
  • temp. przechowywania :+4oC w zaciemnieniu

Immunofluorescencja

TAK

 

Kompatybilność komponentów Chamber Slide z różnymi odczynnikami utrwalającymi.

 

Lab-Tek Chamber Slide używane są w różnych technikach mikroskopowania. Ocena mikroskopowa komórek hodowlanych wymaga użycia wielu różnych procedur utrwalania i barwienia. Utrwalanie ma podstawowe znaczenie dla prawidłowego zachowania interesujących nas struktur komórkowych tkanki lub pojedynczych komórek. Ponad to metody barwienia są zależne od zastosowanej uprzednio techniki i materiału do utrwalania.

Jedno z często zadawanych pytań przez naukowców pracujących z Chamber Slide dotyczy ich kompatybilności z odczynnikami utrwalającymi.

Eksperyment przedstawiony w tej ulotce przedstawia kompatybilność różnych powierzchni wzrostowych Lab-Tek Chamber Slide z ogólnie stosowanymi utrwalaczami w warunkach temperatury rutynowo stosowanej w szeregu technikach.


Materiały

Metody

 

Polistyrenowe “szkiełko” Nr 170920 SlideFlask, “szkiełko” Permanox Chamber Slide Nr 177445, i “szkiełko” szklane Chamber Slide Nr 177402 inkubowano z każdym z odczynników w określonej temperaturze (temp. pokojowa 4-8oC) przez 30 minut.

 

Produkty Nr 177402 i 177445 zawierały 0.5 ml odczynnika na komorę. Produkt Nr 170920 zawierał 4 ml odczynnika na komorę. Po 30 min. odczynnik został wylany a komory usunięte ze “szkiełek”.

Szkiełka i polistyrenowe komory zostały wizualnie ocenione pod względem zmętnienia lub pęknięć. Możliwość usunięcia uszczelki z produktów Nr 177445 i Nr 177402 uznano za pomyślną gdy mogła być ona odciągnięta skalpelem w mniej niż 4 próbach.

Dyskusja


Wyniki przeprowadzonych eksperymentów wykazują, że produkty Nunc, Lab-Tek Chamber Slide są chemicznie kompatybilne z różnymi utrwalaczami ogólnie stosowanymi w hybrydyzacji in situ i histochemii. Aczkolwiek należy zwrócić uwagę, że 100% aceton i niektóre mieszaniny acetonu i alkoholi takich jak metanol lub etanol nie są kompatybilne z komorami polistyrenowymi lub “szkiełkami” polistyrenowymi. Czysty aceton lub zmieszany z alkoholami jest kompatybilny z materiałem “szkiełek” typu Permanox. Odciągnięcie silikonowej uszczelki w produktach Lab-Tek Chamber Slide Nr 177445 i Nr 177402 nie było utrudnione przez utrwalacze.

Wyniki badań kompatybilności odczynników do utrwalania ze składowymi Chamber Slide.

TABELA 1

Wpływ na Chamber Slide, “Szkiełko” Permanox Nr 177445

 

 

Utrwalacz

Stosunek odczynnika

(vol:vol)

Temperatury

4-8oC i

Odlepialność

uszczelki

 temp. pokojowej

Struktura

komory

Aceton:PBS

 

Aceton:Metanol

Aceton:Etanol

Metanol:

Lodowaty Kwas Octowy

Metanol

Etanol

Aceton

Lodowaty Kwas Octowy

Paraformaldeyd

Glutaraldehyd

Formaldeyd

Formamid

Formamid

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

3:1

2:3

3:2

4:1

100%

100%

100%

100%

4%

4%

10%

50%

100%

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

S

S

S

S

S

D

S

D

D

S

S

S

S

S

S

D

S

S

S

S

S

S

 

Legenda: A: pozytywna próba odklejania

D: zniszczona

S: satysfakcjonująca (nienaruszona)

Wyniki badań kompatybilności odczynników do utrwalania ze składowymi Chamber Slide.

TABELA 3

Wpływ na polistyrenową SlideFlask. Produkt Nr 170920

 

 

Utrwalacz

Stosunek odczynnika

(vol:vol)

Temperatury

4-8oC i temp. pokojowej

Struktura

komory

Aceton:PBS

 

Aceton:Metanol

Aceton:Etanol

Metanol:

Lodowaty Kwas Octowy

Metanol

Etanol

Aceton

Lodowaty Kwas Octowy

Paraformaldeyd

Glutaraldehyd

Formaldeyd

Formamid

Formamid

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

3:1

2:3

3:2

4:1

100%

100%

100%

100%

4%

4%

10%

50%

100%

S

S

S

S

S

D

S

D

D

S

S

S

S

S

S

D

S

S

S

S

S

S

 

Legenda: A: pozytywna próba odklejania

D: zniszczona

 

S: satysfakcjonująca (nienaruszona)

 

 Wyniki badań kompatybilności odczynników do utrwalania ze składowymi Chamber Slide.

TABELA 2

Wpływ na Chamber Slide Szklane “Szkiełko” Nr 177402

 

 

Utrwalacz

Stosunek odczynnika

(vol:vol)

Temperatury

4-8oC i

Odlepialność

uszczelki

 temp. pokojowej

Struktura

komory

Aceton:PBS

 

Aceton:Metanol

Aceton:Etanol

Metanol:

Lodowaty Kwas Octowy

Metanol

Etanol

Aceton

Lodowaty Kwas Octowy

Paraformaldeyd

Glutaraldehyd

Formaldeyd

Formamid

Formamid

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

2:3

3:2

4:1

3:1

2:3

3:2

4:1

100%

100%

100%

100%

4%

4%

10%

50%

100%

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

S

S

S

S

S

D

S

D

D

S

S

S

S

S

S

D

S

S

S

S

S

S

 

Legenda: A: pozytywna próba odklejania

D: zniszczona

S: satysfakcjonująca (nienaruszona)